外泌體表征與定量難在什么地方？又該怎么做？我們拜訪過(guò)很多外泌體研究工作者，其中談到多的是外泌體難以分離，分離后的外泌體不好定量，定量的外泌體數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確等問(wèn)題。2.單一表征方法的局限性對(duì)外泌體的純度表征目前采用的是外泌體陰性蛋白標(biāo)志、顆粒蛋白比。外泌體陰性蛋白標(biāo)志一般采用WB檢測(cè)，屬于定性檢測(cè)，與樣本處理、抗體、顯色、曝光時(shí)間等多個(gè)因素有關(guān)，如果作為純度表征的指標(biāo)，顯然是不合適的。在蛋白聚集體或其他雜質(zhì)（糖/脂質(zhì)/核酸等）聚集體/大顆粒較多時(shí)，顆粒蛋白比的數(shù)值也可能較大，其作為純度表征指標(biāo)也有其局限性。既然上述外泌體定量方法、表征方法具有其局限性，那么如何科學(xué)的對(duì)外泌體進(jìn)行定量和表征呢？外泌體研究工具批量訂單快速交付，減少等待時(shí)間，保障研究進(jìn)度。實(shí)驗(yàn)室外泌體技術(shù)服務(wù)

脂質(zhì)定量試劑盒不止于外泌體表征！脂質(zhì)是一大類分子，包括甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯、脂肪、甾醇等。脂質(zhì)不僅是生物膜的骨架成分，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，而且還參與細(xì)胞過(guò)程，如膜運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和能量?jī)?chǔ)存。脂質(zhì)代謝的紊亂與許多疾病有關(guān)，例如阿茲海默癥、糖尿病、肥胖癥、、和神經(jīng)退行性疾病以及某些傳染病等。為了研究脂質(zhì)，通常必須首先從組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中提取脂質(zhì)，然后進(jìn)行定量。脂質(zhì)定量需要昂貴的設(shè)備，例如HPLC、光散射檢測(cè)技術(shù)或LatroscanTLC-FID分析儀。WSR0028脂質(zhì)定量試劑盒使用硫代磷酸香草醛法測(cè)量樣品的脂質(zhì)含量(不飽和脂肪酸)，從而產(chǎn)生適用于多孔板檢測(cè)的簡(jiǎn)單比色讀數(shù)。首先，將粗制或純化的脂質(zhì)樣品加到96孔板中。然后加入濃硫酸，加熱樣品以溶解總脂質(zhì)樣品，隨后加入脂質(zhì)定量試劑。在酸性條件下，脂質(zhì)與香草醛反應(yīng)形成比色產(chǎn)物，該比色產(chǎn)物易于在酶標(biāo)儀上檢測(cè)。維思克思的脂質(zhì)定量試劑盒ExosomalLipidQuantificationKit(Fluorometric)（WSR0028-2）與WSR0028相結(jié)合，可更好表征外泌體，LNP等！HEK293胞外囊泡基礎(chǔ)研究外泌體研究工具自動(dòng)化操作兼容，適配實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)，提升工作效率。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答51.外泌體樣品如何保存？長(zhǎng)期保存，置于-80℃。凍存前，離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片，再將樣品分裝保存在-80℃。如果條件允許，建議用新鮮樣品進(jìn)行外泌體的分離和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。短期保存（1-2天），置于4℃（確保無(wú)菌）。2.分離的外泌體如何保存？（1）使用低吸附離心管或凍存管，減少外泌體粘附。（2）對(duì)于短期而言，外泌體可以在4°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)1周。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，外泌體可以在-20°C或-80°C下儲(chǔ)存。當(dāng)長(zhǎng)期儲(chǔ)存外泌體時(shí)，重要的是要考慮它們是否需要多次解凍。如果需要多次應(yīng)用（因此需要多次解凍）進(jìn)行分析，我們建議將外泌體懸浮液等分到多個(gè)試管中，以便每個(gè)試管只經(jīng)歷一個(gè)冷凍/解凍循環(huán)。多次凍融循環(huán)會(huì)對(duì)外泌體造成損傷并減少其數(shù)量。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答119.在分離過(guò)程中，外泌體含量會(huì)發(fā)生變化嗎？準(zhǔn)備的步驟越少，結(jié)果越好。很明顯，即使你是一個(gè)非常熟練的操作員，將超離作為預(yù)富集步驟也會(huì)導(dǎo)致囊泡的損失。因此，即使囊泡的純度很高，也無(wú)法控制哪些囊泡在處理過(guò)程中的丟失。10.為什么沉淀法或超速離心法提取的外泌體看不到沉淀？這種問(wèn)題通常有三種可能性：1）使用的樣本體積太小或外泌體含量太低。2）使用了不透明的超速離心管，一般來(lái)說(shuō)外泌體產(chǎn)量都比較小，不透明管底很難見(jiàn)到明顯沉淀的，可以當(dāng)作有沉淀，繼續(xù)往后操作即可。3）使用了粘附性低的耗材。部分角轉(zhuǎn)管壁粘附性很低，沉淀很難富集或沉淀很容易滑落，請(qǐng)圓底離心管離心。11.外泌體和微囊泡可以分開(kāi)提取嗎？外泌體和微囊泡無(wú)法明確區(qū)分二者，所以無(wú)法完全分開(kāi)。維思克思推薦使用下列簡(jiǎn)便方法：提取外泌體等粒子直徑小的細(xì)胞外囊泡時(shí)，請(qǐng)選用10000g離心后的上清樣品；提取含微囊泡在內(nèi)的大粒子直徑的細(xì)胞外囊泡時(shí)，首先要回收1200g離心的上清，然后將其10,000g離心分離獲得的沉淀用PBS懸浮后作為樣品使用。同時(shí)提取上述兩種細(xì)胞外囊泡，請(qǐng)使用1200g離心分離的上清作為樣品。外泌體研究工具常溫運(yùn)輸設(shè)計(jì)，無(wú)需冷鏈物流，降低運(yùn)輸成本與風(fēng)險(xiǎn)。

外泌體定量和表征。研究外泌體的同行們（包括我）一直被外泌體的定量和表征所困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？是評(píng)估其活性？純度？蛋白濃度？還是其他什么指標(biāo)？或者說(shuō)我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣對(duì)外泌體進(jìn)行定量呢？這個(gè)可以說(shuō)是進(jìn)行外泌體實(shí)驗(yàn)的**步，必須確定外泌體的量，才好判斷實(shí)驗(yàn)變量是否影響外泌體的發(fā)生或者確定下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。你們是如何進(jìn)行定量的呢？目前的外泌體定量方法有以下幾種，分別是：納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、表面標(biāo)志物的ELISA定量試劑盒、BCA或Bradford蛋白定量試劑盒。注：受認(rèn)知所限，有沒(méi)有涵蓋的，歡迎補(bǔ)充。上述外泌體定量方法中，以BCA蛋白濃度測(cè)定應(yīng)用的廣，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我們分離的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這就導(dǎo)致我們很難確定蛋白量與外泌體量的對(duì)應(yīng)關(guān)系。所以，我們這些外泌體研究者就在兩難之間不斷橫跳。為了解決這些困境，維思克思生物科技提供了整套外泌體鑒定技術(shù)服務(wù)、外泌體分離、示蹤、保存、游離染料清qing除、蛋白定量、脂質(zhì)定量、核酸定量等系列產(chǎn)品。外泌體研究工具常溫保存設(shè)計(jì)，無(wú)需特殊冷藏設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)存成本。金線蓮EVs定制生產(chǎn)

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外泌體分離提取方法大全外泌體快速、簡(jiǎn)便、高純度、高回收率的分離方法是在大規(guī)模應(yīng)用的前提。維思克思編制了外泌體分離方法大全：親和磁珠法分離（WSR0002-2）能特異性捕獲外泌體，實(shí)現(xiàn)高純度、高回收率外泌體分離。具有操作簡(jiǎn)便、高純度和高回收率等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本中的外泌體分離。凝膠排阻色譜法分離（WSR0003）基于分子排阻色譜（SEC）原理，根據(jù)被分離組分分子大小差異進(jìn)行外泌體的分離，可以獲取分子大小均一、高純度的外泌體。特別適用于大體積樣本中的外泌體分離。SEC離心法分離（WSP0015/WSP0016）是離心柱式的外泌體分離產(chǎn)品，離心柱中裝填的介質(zhì)能無(wú)差別地吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體，實(shí)現(xiàn)超快速、高收率的外泌體分離。沉淀法分離（WSR0026/WSR0037）是一款沉淀法外泌體分離試劑盒，可用于多種樣本的外泌體分離，具有操作簡(jiǎn)便、分離速度快和外泌體回收率高等特點(diǎn)。離子交換法分離（WSR0031）適用于10-30mL細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本中外泌體的分離純化，基于陰離子交換層析原理，特異性吸附樣本中帶負(fù)電的外泌體，然后高效洗脫，實(shí)現(xiàn)外泌體的濃縮和分離。實(shí)驗(yàn)室外泌體技術(shù)服務(wù)

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